Объекты исследования и подготовка препаратов

Препараты гумусовых веществ из почв выделялись Н. П. Бельчиковой при помощи 0,1-я ОН; разделение гуминовых кислот и фульвокислот производилось подкислением щелочной вытяжки (подробно о выделении препаратов, их очистке и химической характеристике см. в статье М. М. Кононовой — 5).
Для получения препаратов гумусоподобных продуктов жизнедеятельности гриба’ Азрег^Шиз шдег последний выращивался нами в специальных больших колбах на жидкой синтетической среде, в состав которой входят минеральные соли (КН2РО4, КС1, М§504, Ре504, 2п504) и глюкоза, как источник энергии.
В отдельной серии опыта со средой того же состава велись периодические наблюдения за развитием грибных пленок, изменением реакции среды, скоростью потребления сахара, появлением в культуральной жидкости продуктов обмена. Эти наблюдения показали, что по мере развития гриба и исчезновения глюкозы в среде шло накопление продуктов обмена — аминокислот, белкового азота, а также ароматических веществ типа полифенолов и гликозидов, жидкость постепенно приобретала темно-коричневую окраску, что связано, очевидно, с автолизом грибных пленок и новообразованием гумусовых веществ.
Для выделения последних темную культуральную жидкость отфильтровывали от пленок через двойной бумажный фильтр, доводили до
полной прозрачности повторным фильтрованием, после чего в ней коагулировали темноокрашенные вещества с помощью Н25С>4 при кратковременном нагревании раствора. Полученный хлопьевидный осадок несколько раз промывали водой и после диализа в целлофановых мешочках высушивали на воздухе.
Для изучения химической природы азота гуминовых и фульвокислот, равно как и новообразованных гумусовых веществ, полученные препараты подвергали кислотному гидролизу.
Гидролиз проводили при помощи 6-л НС1 на нагретой до 1°С 125—13(Г глицериновой бане в течение 20 часов в колбочках емкостью на 15 мл с пришлифованными к ним обратными холодильниками в виде длинной: стеклянной трубки. Навески для гидролиза брали из такого расчета, чтобы исходное содержание азота во всех навесках было одинаковым; для гидролиза брали 10 мл кислоты.
По окончании гидролиза содержимое колбочек, предварительно разбавленное водой, отфильтровывали от нерастворимого осадка через смоченный водой бумажный фильтр. Осадок несколько раз промывали на фильтре, после чего фильтрат вместе с промывными водами переносили в фарфоровую чашечку и упаривали почти досуха на водяной бане при 35—40° для удаления избытка НС1. Выпаривание повторяли 5—6 раз, добавляя каждый раз новые порции воды. Конечный объем гидролизата доводили до 2—5 мл.
Кроме прямого гидролиза с 6-п НС1, во второй серии анализов нами был проведен последовательный гидролиз тех же препаратов: сначала при помощи 2% НС1 в течение 2'/г час., затем нерастворившийся остаток, отделенный от гидролизата центрифугированием, заливали 6-п НС1 а вновь - гидролизовали в течение 20 час. Дальнейшая обработка гидролизатов велась описанным выше способом.
В гидролизатах методом микрокьельдаля определяли общее содержание растворимого азота, диффузным, способом Конвея — количество аммиачного азота, и при помощи распределительной хроматографии на бумаге анализировали аминокислотный состав гидролизатов.